Avemu spartutu parechje cunsiderazioni a settimana passata per l'usu di l'elettroforesi di a membrana d'acetate di cellulosa, è finiremu stu tema quì oghje per a vostra riferenza.
Selezzione di Concentrazione di tampone
A concentrazione di buffer utilizata in l'elettroforesi di a membrana di acetate di cellulosa hè generalmente più bassa di quella utilizata in l'elettroforesi di carta.U pH cumunimenti usatu 8,6BU tampone arbitale hè tipicamente sceltu in a gamma di 0,05 mol/L à 0,09 mol/L.Quandu selezziunate a cuncentrazione, una determinazione preliminare hè fatta.Per esempiu, se a lunghezza di a striscia di a membrana trà l'elettrodi in a camera di l'elettroforesi hè di 8-10 cm, una tensione di 25V hè necessaria per centimetru di lunghezza di a membrana, è l'intensità di corrente deve esse 0,4-0,5 mA per centimetru di larghezza di a membrana.Se questi valori ùn sò micca ottenuti o superati durante l'elettroforesi, a concentrazione di buffer deve esse aumentata o diluita.
Una cuncentrazione di buffer eccessivamente bassa hà da risultatu in un muvimentu rapidu di e bande è un aumentu di a larghezza di banda.Per d 'altra banda, una cuncentrazione di buffer eccessivamente alta rallentarà a migrazione di a banda, rendendu difficiuli di distinguerà certe bande di separazione.
Semu devi esse nutatu chì in l'elettroforesi di a membrana di l'acetate di cellulosa, una parte significativa di u currente hè purtatu à traversu a mostra, chì genera una quantità considerableu di calore.A volte, a cuncentrazione di buffer scelta pò esse cunsiderata appruvata.In ogni casu, in cundizioni di temperatura ambientale aumentata o quandu si usa una tensione più alta, l'evaporazione di l'acqua per via di u calore pò intensificà, risultatu in una concentrazione di buffer eccessivamente alta è ancu pruvucannu chì a membrana si secca.
Sample Volume
In l'elettroforesi di a membrana d'acetate di cellulosa, a quantità di volume di mostra hè determinata da parechji fatturi, cumprese e cundizioni di l'elettroforesi, proprietà di a mostra stessa, metudi di tintura è tecniche di rilevazione.Comu principiu generale, u più sensibile u metudu di rilevazione, u più chjucu u voluminu di mostra pò esse, chì hè vantaghju per a separazione.Se u voluminu di mostra hè eccessivu, i mudelli di separazione elettroforetica pò esse micca chjaru, è a tintura pò ancu esse di tempu.Tuttavia, quandu si analizzanu quantitativamente e bande macchiate separate cù metudi di rilevazione colorimetrica di l'eluzione, u voluminu di mostra ùn deve esse troppu chjucu, postu chì pò risultà in valori di assorbanza più bassi per certi cumpunenti, purtendu à errori più altu in u calculu di u so cuntenutu.In tali casi, u voluminu di mostra deve esse aumentatu in modu adattatu.
Di genere, u voluminu di mostra aghjuntu à ogni centimetru di a linea di applicazione di mostra varia da 0,1 à 5 μL, equivalente à una quantità di mostra di 5 à 1000 μg.Per esempiu, in l'analisi di l'elettroforesi di a proteina di u serum di rutina, u voluminu di mostra aghjuntu à ogni centimetru di a linea di applicazione generalmente ùn supera 1 μL, equivalenti à 60 à 80 μg di proteina.Tuttavia, quandu si analizzanu lipoproteini o glicoproteini cù u stessu metudu elettroforesi, u voluminu di mostra deve esse aumentatu in modu currispundente.
In cunclusioni, u voluminu di mostra più adattatu deve esse sceltu basatu nantu à e cundizioni specifiche attraversu una seria di esperimenti preliminari.
Selezzione di suluzione di tintura
E bande separate in l'elettroforesi di a membrana di acetate di cellulosa sò tipicamente macchiate prima di a rilevazione.Diversi cumpunenti di mostra necessitanu diversi metudi di tintura, è i metudi di tintura adattati per l'elettroforesi di a membrana d'acetate di cellulosa ùn ponu micca esse appiicati cumpletamente à a carta di filtru.
Ci sò trè principii maiò per sceglie a suluzione di tinturamembrana in acetate di cellulosa.Prima,I tinti solubili in acqua sò preferiti à i tinti solubili in alcolu per evità a ritirata di a membrana è a deformazione causata da a suluzione di tintura di l'ultime.Dopu à staining, hè impurtante lavà a membrana cù l'acqua è minimizzà a durazione di staining.Altrimenti, a membrana pò esse curled o shrunken, chì affettanu a deteczione sussegwenti.
Siconda, hè preferibile selezziunà tinti cù una forte affinità di tintura per a mostra.In l'elettroforesi di a membrana di l'acetate di cellulosa di e proteine serum, l'amino negru 10B hè comunmente utilizatu per via di a so forte affinità di tintura per vari cumpunenti di proteine serum è a so stabilità.
In terzu, si deve esse sceltu tinture di qualità affidabile.Certi tinture, malgradu avè u listessu nome, ponu cuntene impurità chì risultatu in un fondo particularmente scuru dopu a tintura.Questu pò ancu sbulicà e bande originalmente ben separate, facendu difficiuli di distingue.
Infine, a scelta di a cuncentrazione di suluzione di tintura hè impurtante.In teorica, puderia pare chì una cuncentrazione di suluzione di tintura più alta porta à una colorazione più accurata di i cumpunenti di campionu è risultati di tintura megliu.Tuttavia, questu ùn hè micca u casu.L'affinità di ubligatoriu trà i cumpunenti di mostra è a tintura hà un certu limitu, chì ùn aumenta micca cù l'aumentu di a cuncentrazione di suluzione di tintura.À u cuntrariu, una cuncentrazione eccessivamente alta di a suluzione di tintura ùn solu perde u tintu, ma ancu rende difficiule di ottene un fondo chjaru.Inoltre, quandu l'intensità di u culore righjunghji un certu valore massimu, a curva d'assorbanza di a tintura ùn seguita micca una relazione lineale, soprattuttu in misurazioni quantitative.
Detaglii per sapè nantu à Beijing Liuyi Biotechnology's membrana in acetate di cellulosacisterna di elettroforesi è a so applicazione di elettroforesi, visitate quì:
lEsperimentu per a separazione di a proteina di serum da a Membrana di Acetate di Cellulosa
lElettroforesi a membrana in acetate di cellulose
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Riferimentu:Electrophoresis (Seconda edizione) da u Signore Li
Tempu di post: 06-06-2023