Cos'è l'elettroforesi su gel di poliacrilammide?

Elettroforesi in gel di poliacrilammide

L'elettroforesi in gel hè una tecnica fundamentale in i laboratori in tutte e discipline biologiche, chì permette a separazione di macromolecule cum'è DNA, RNA è proteini.Diversi media di separazione è meccanismi permettenu à i subsets di sti molécule per esse separati in modu più efficace sfruttendu e so caratteristiche fisiche.Per i proteini in particulare, l'elettroforesi in gel di poliacrilamide (PAGE) hè spessu a tecnica di scelta.

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PAGE hè una tecnica chì separa macromolecule cum'è e proteine ​​​​basatu nantu à a so mobilità elettroforetica, vale à dì, a capacità di l'analytes di trasfurmà versu un elettrodu di a carica opposta.In PAGE, questu hè determinatu da a carica, a dimensione (pesu moleculare) è a forma di a molécula.L'analiti si movenu attraversu i pori formati in gel di poliacrilamide.A cuntrariu di l'ADN è l'ARN, i proteini varienu in carica secondu l'aminoacidi incorporati, chì ponu influenzà cumu si currianu.E corde d'aminoacidu ponu ancu formate strutture secondarie chì impactanu a so dimensione apparente è, in cunseguenza, cumu si sò capaci di spustà attraversu i pori.Per quessa, a volte, pò esse desideratu di denature e proteine ​​​​prima di l'elettroforesi per linearizà si una stima più precisa di a dimensione hè necessaria.

PAGINA SDS

L'elettroforesi in gel di poliacrilamide di sodium-dodecyl sulfate hè una tecnica utilizata per separà e molécule di proteine ​​​​di masse da 5 à 250 kDa.I proteini sò separati solu nantu à a basa di u so pesu moleculare.Sodium dodecyl sulfate, un surfactant anionicu, hè aghjuntu in a preparazione di gels chì maschere i carichi intrinseci di i campioni di prutezione è li dà una carica simile à a proporzione di massa.In parolle simplici, denatura i proteini è li dà una carica negativa.

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PAGINA nativa

Native PAGE hè una tecnica chì usa gels non denaturati per a separazione di e proteine.A cuntrariu di SDS PAGE, ùn hè micca aghjuntu agenti denaturanti in a preparazione di gel.In u risultatu, a siparazione di e proteini si faci nantu à a basa di a carica è a dimensione di e proteini.In questa tecnica, a conformazione, u plegamentu è e catene di aminoacidu di e proteine ​​​​sò i fatturi chì a separazione dipende.I prutiìni ùn sò micca dannighjati in stu prucessu, è ponu esse ricuperati dopu à a fine di a separazione.

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Cumu funziona l'elettroforesi in gel di poliacrilammide (PAGE)?

U principiu di basa di PAGE hè di separà analiti passendu per i pori di un gel di poliacrilamide cù un currente elettricu.Per ottene questu, una mistura di acrilamida-bisacrilamida hè polimerizzata (poliacrilamida) per l'aghjunzione di persulfate d'ammoniu (APS).A reazione, chì hè catalizzata da a tetramethylethylenediamine (TEMED), forma una struttura cum'è rete cù pori à traversu i quali l'analiti ponu spustà (Figura 2).Quantu più altu hè u percentualità di l'acrilamida tutale inclusa in u gelu, più chjuca hè a dimensione di i pori, per quessa, più chjuche sò e proteine ​​​​chì puderanu passà.U rapportu di l'acrilamida à a bisacrilamida hà ancu un impattu in a dimensione di i pori, ma questu hè spessu mantene constantu.E dimensioni di i pori più chjuchi riducenu ancu a velocità à a quale e proteine ​​​​piccole sò capaci di passà per u gelu, migliurà a so risoluzione è impediscenu di scappà rapidamente in u buffer quandu u currente hè applicatu.

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Apparecchiatura per l'elettroforesi in gel di poliacrilammide

Cellule di elettroforesi in gel (tank/camera)
U tank di gel per l'elettroforesi in gel di poliacrilamide (PAGE) hè diversu da u tank di gel di agarose.U tank di gel d'agarose hè horizontale, mentre chì u tank PAGE hè verticale.Per una cellula d'elettroforesi verticale (tank / camera), un gel magre (normalmente 1,0 mm o 1,5 mm) hè versatu trà dui vetri di vetru è muntatu in modu chì u fondu di u gelu hè sottumessu in buffer in una camera è a cima hè immersa in buffer. in una altra camera.Quandu u currente hè appiicatu, una piccula quantità di buffer migra per u gel da a camera superiore à a camera di fondu.Cù morsetti forti per guarantisci chì l'assemblea stà in una pusizione verticale, l'equipaggiu facilita scorri veloci di gel cun un raffreddamentu uniforme chì risulta in bande distinte.

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Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) fabrica una gamma di dimensioni di celle d'elettroforesi in gel di poliacrilammide (serbatoi / camere).I mudelli DYCZ-20C è DYCZ-20G sò cellule d'elettroforesi verticali (tanks/camere) per l'analisi di sequencing DNA.Alcune di e cellule di elettroforesi verticali (tanks / camere) sò cumpatibili cù u sistema di blotting, cum'è u mudellu DYCZ-24DN, DYCZ-25D è DYCZ-25E sò cumpatibili cù u sistema Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G è DYCZ-40F, chì sò usati per trasferisce a molécula di proteina da u gel à a membrana.Dopu l'elettroforesi SDS-PAGE, Western Blotting hè una tecnica per detectà una proteina specifica in una mistura di prutezione.Pudete sceglie questi sistemi di blotting secondu i bisogni sperimentali.

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Alimentazione di l'elettroforesi
Per furnisce l'elettricità per u funziunamentu di u gelu, avete bisognu di una fonte d'elettroforesi.In Liuyi Biotechnology furnimu una gamma di alimentatori di elettroforesi per tutte l'applicazioni.U mudellu DYY-12 è DYY-12C cù alta tensione stabile è currente ponu risponde à l'elettroforesi di alta tensione.Havi a funzione di stand, timing, VH è applicazione step-by-step.Sò ideali per l'applicazione di l'elettroforesi di sequencing IEF è DNA.Per l'applicazione di l'elettroforesi di a proteina generale è di l'ADN, avemu u mudellu DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, è cusì, chì sò ancu forniture di energia di vendita calda cù cellule d'elettroforesi (tanks/camere).Quessi ponu esse aduprati per l'applicazioni di l'elettroforesi di tensione media è bassa, cum'è per l'usu di u labburatoriu di a scola, u labburatoriu di l'ospitale è cusì.Più mudelli per l'alimentazione elettrica, visitate u nostru situ web.

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A marca Liuyi hà più di 50 anni di storia in Cina è a cumpagnia pò furnisce prudutti stabili è d'alta qualità in tuttu u mondu.À traversu anni di sviluppu, hè degnu di a vostra scelta!

Per più infurmazione nantu à noi, per piacè cuntattateci per email[email prutettu] or [email prutettu].

Riferimenti per Cos'è l'elettroforesi in gel di poliacrilammide?
1. Karen Steward PhD Elettroforesi in gel di poliacrilammide, cumu funziona, varianti di tecniche è e so applicazioni


Tempu di post: 23-May-2022