Elettroforesi in gel di poliacrilammide
L'elettroforesi in gel hè una tecnica fundamentale in i laboratori in tutte e discipline biologiche, chì permette a separazione di macromolecule cum'è DNA, RNA è proteini. Diversi media di separazione è meccanismi permettenu à i subsets di sti molécule per esse separati più efficacemente sfruttendu e so caratteristiche fisiche. Per i proteini in particulare, l'elettroforesi in gel di poliacrilamide (PAGE) hè spessu a tecnica di scelta.
PAGE hè una tecnica chì separa macromolecule cum'è e proteine basatu nantu à a so mobilità elettroforetica, vale à dì l'abilità di l'analytes per andà versu un elettrodu di a carica opposta. In PAGE, questu hè determinatu da a carica, a dimensione (pesu moleculare) è a forma di a molécula. L'analiti si movenu attraversu i pori formati in gel di poliacrilamide. A cuntrariu di l'ADN è l'ARN, i proteini varienu in carica secondu l'aminoacidi incorporati, chì ponu influenzà cumu si currianu. E corde d'aminoacidu ponu ancu formate strutture secondarie chì impactanu a so dimensione apparente è, in cunseguenza, cumu si sò capaci di spustà attraversu i pori. Per quessa, a volte, pò esse desideratu di denature e proteine prima di l'elettroforesi per linearizà si una stima più precisa di a dimensione hè necessaria.
PAGINA SDS
L'elettroforesi in gel di poliacrilamide di sodium-dodecyl sulfate hè una tecnica utilizata per separà e molécule di proteine di masse da 5 à 250 kDa. I proteini sò separati solu nantu à a basa di u so pesu moleculare. Sodium dodecyl sulfate, un surfactant anionicu, hè aghjuntu in a preparazione di gels chì maschere i carichi intrinseci di i campioni di prutezione è li dà una carica simile à a proporzione di massa. In parolle simplici, denatura i proteini è li dà una carica negativa.
PAGINA nativa
Native PAGE hè una tecnica chì usa gels non denaturati per a separazione di e proteine. A cuntrariu di SDS PAGE, ùn hè micca aghjuntu agenti denaturanti in a preparazione di gel. In u risultatu, a siparazione di e proteini si faci nantu à a basa di a carica è a dimensione di e proteini. In questa tecnica, a conformazione, u plegamentu è e catene di aminoacidu di e proteine sò i fatturi chì a separazione dipende. I prutiìni ùn sò micca danucati in stu prucessu, è ponu esse recuperati dopu à a fine di a separazione.
Cumu funziona l'elettroforesi in gel di poliacrilammide (PAGE)?
U principiu di basa di PAGE hè di separà analiti passendu per i pori di un gel di poliacrilamide cù un currente elettricu. Per ottene questu, una mistura di acrilamida-bisacrilamida hè polimerizzata (poliacrilamida) per l'aghjunzione di persulfate d'ammoniu (APS). A reazione, chì hè catalizzata da a tetramethylethylenediamine (TEMED), forma una struttura cum'è rete cù pori à traversu i quali l'analiti ponu spustà (Figura 2). Quantu più altu hè u percentualità di l'acrilamida tutale inclusa in u gelu, più chjuca hè a dimensione di i pori, per quessa, più chjuche sò e proteine chì puderanu passà. U rapportu di l'acrilamida à a bisacrilamida hà ancu un impattu in a dimensione di i pori, ma questu hè spessu mantene constantu. E dimensioni di i pori più chjuchi riducenu ancu a velocità à a quale e proteine piccole sò capaci di passà per u gelu, migliurà a so risoluzione è impediscenu di scappà rapidamente in u buffer quandu u currente hè applicatu.
Apparecchiatura per l'elettroforesi in gel di poliacrilammide
Cellule di elettroforesi in gel (tank/camera)
U tank di gel per l'elettroforesi in gel di poliacrilamide (PAGE) hè diversu da u tank di gel di agarose. U tank di gel d'agarose hè horizontale, mentri u tank PAGE hè verticale. Per una cellula d'elettroforesi verticale (tank / camera), un gel magre (normalmente 1,0 mm o 1,5 mm) hè versatu trà dui vetri di vetru è muntatu in modu chì u fondu di u gelu hè sottumessu in buffer in una camera è a cima hè immersa in buffer. in una altra camera. Quandu u currente hè appiicatu, una piccula quantità di buffer migra à traversu u gel da a camera superiore à a camera di fondu. Cù morsetti forti per guarantisci chì l'assemblea stà in una pusizione verticale, l'equipaggiu facilita scorri veloci di gel cun un raffreddamentu uniforme chì risulta in bande distinte.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) fabrica una gamma di dimensioni di celle d'elettroforesi in gel di poliacrilammide (serbatoi / camere). I mudelli DYCZ-20C è DYCZ-20G sò cellule d'elettroforesi verticali (tanks/camere) per l'analisi di sequencing DNA. Alcune di e cellule di elettroforesi verticali (tanks / camere) sò cumpatibili cù u sistema di blotting, cum'è u mudellu DYCZ-24DN, DYCZ-25D è DYCZ-25E sò cumpatibili cù u sistema Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G è DYCZ-40F, chì sò usati per trasferisce a molécula di proteina da u gel à a membrana. Dopu l'elettroforesi SDS-PAGE, Western Blotting hè una tecnica per detectà una proteina specifica in una mistura di prutezione. Pudete sceglie questi sistemi di blotting secondu i bisogni sperimentali.
Alimentazione di l'elettroforesi
Per furnisce l'elettricità per u funziunamentu di u gelu, avete bisognu di una fonte d'elettroforesi. In Liuyi Biotechnology furnimu una gamma di alimentatori di elettroforesi per tutte l'applicazioni. U mudellu DYY-12 è DYY-12C cù alta tensione stabile è currente ponu risponde à l'elettroforesi di alta tensione. Havi a funzione di stand, timing, VH è applicazione step-by-step. Sò ideali per l'applicazione di l'elettroforesi di sequencing IEF è DNA. Per l'applicazione di l'elettroforesi di a proteina generale è di l'ADN, avemu u mudellu DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, è cusì, chì sò ancu forniture di energia di vendita calda cù cellule d'elettroforesi (tanks/camere). Quessi ponu esse aduprati per l'applicazioni di l'elettroforesi di tensione media è bassa, cum'è per l'usu di u labburatoriu di a scola, u labburatoriu di l'ospitale è cusì. Più mudelli per l'alimentazione, visitate u nostru situ web.
A marca Liuyi hà più di 50 anni di storia in Cina è a cumpagnia pò furnisce prudutti stabili è d'alta qualità in tuttu u mondu. À traversu anni di sviluppu, hè degnu di a vostra scelta!
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Riferimenti per Cos'è l'elettroforesi in gel di poliacrilammide?
1. Karen Steward PhD Elettroforesi in gel di poliacrilammide, Funziona, Varianti di Tecnica, è E so applicazioni
Tempu di post: 23-May-2022