Elettroforesi in gel di DNA: analizà i frammenti genetichi

L'elettroforesi in gel di DNA hè una tecnica di biologia moleculare cumuni aduprata per separà è analizà i frammenti di DNA basatu nantu à e so dimensioni. U prucessu implica a carica di frammenti di DNA di diverse dimensioni nantu à un gel fattu di agarose, un carbuidratu chì si trova in l'alga rossa.

Preparazione è casting u gel d'agarose

1. Dissolve l'agarose in una quantità adatta di buffer di elettroforesi. A cuncentrazione di u gel hè determinata da u rapportu massa-volume, cum'è 1g di agarose in 100.ml di buffer per un gel 1%.
2. Scaldate a mistura in un micru, rotendu u cuntinuu per assicurà a dissoluzione completa di l'agarose.
3. Aggiuncenu bromuru di etidio à a suluzione di gel à una cuncentrazione finale di 0,5mg/ ml. U bromuru di ethidium intercalate trà coppie di basi di DNA adiacenti è emette fluorescenza aranciu sottu a luce UV. Innota chì u bromuru di etidio hè un carcinogenu, per quessa, a manipulazione richiede misure di sicurezza adattate cum'è l'usu di guanti.
4. Raffredda a suluzione di gel in un bagnu d'acqua per prevene chì a tavula di gel si deforma per via di l'alte temperature.
5. Pone un pettine in a suluzione di gel per furmà pozzi di mostra. Selezziunate pettini adattati per a quantità di campione di DNA chì caricherete. Versa a suluzione di gel d'agarose in uvassa di gelè lasciate solidificà à a temperatura di l'ambienti.
6. Quandu u gel hè solidificatu, sguassate u pettine. Se ùn aduprate micca u gel immediatamente, imbulighjate in una pellicola plastica è guardate à 4 ℃ finu à chì hè necessariu.

Preparazione è esecuzione di u gel

Prima di inizià l'elettroforesi, mischjà a mostra di DNA cù u buffer di carica. U buffer di carica hè di solitu sei volte più cuncintratu è aiuta à a mostra à affruntà à u fondu di i pozzi è seguità u muvimentu durante l'elettroforesi.

Pone l'alimentazione à a tensione specificata.

Aghjunghjite abbastanza buffer d'elettroforesi à u tank di gel per copre a superficia di u gel.Assicuratevii cunnessione di l'elettrodi curretta.

Caricà a mostra di DNA è i marcatori di pesu moleculare in i pozzi di gel.

Accende l'alimentazione per inizià l'elettroforesi.

Osservà i frammenti di DNA separati

Dopu l'elettroforesi, spegne l'alimentazione è sguassate u gel.

Aduprate una fonte di luce UV per illuminà u gel; I frammenti di DNA appariranu cum'è bande fluorescenti aranciu.

Documentate l'immagine di gel per analizà i frammenti di DNA separati.

Dopu à l'esperimentu, assicuratevi di a dispusizione curretta di u gel è u buffer di l'elettroforesi, seguendu e linee di u laboratoriu. Purtate sempre guanti durante a manipulazione di gel è tamponi chì cuntenenu bromuru d'ethidium per prutegge da l'esposizione à sta sustanza periculosa.

L'elettroforesi di gel di DNA hè largamente usata in a ricerca di biologia moleculare è genetica per a stima di e dimensioni di e molècule di DNA, a separazione di frammenti di DNA, a rilevazione di mutazioni genetiche è l'impronta digitale di DNA, trà altre applicazioni. Hè una tecnica sperimentale simplice è efficace chì aiuta à capisce a cumpusizioni è e caratteristiche di i campioni di DNA.

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