Elettroforesi di DNA Problemi cumuni

L'elettroforesi di gel hè unu di i metudi maiò utilizati in a biologia molekulari per l'analisi di DNA.Stu metudu implica a migrazione di frammenti di DNA à traversu un gel, induve sò siparati in basa di grandezza o forma.Tuttavia, avete mai scontru qualchì errore durante i vostri esperimenti di l'elettroforesi, cum'è bande smeared in u gel d'agarose, o senza bande nantu à u gel?Chì puderia esse a causa di sti errori?

fastidiosu

I nostri tecnichi anu riassuntu coppie di risoluzione di prublemi quì per a vostra riferenza.

1. Bandi smeared in gel d'agarose

strisciate bande nantu à u gel

U DNA hè statu degradatu.Evite a contaminazione di nucleasi.

● U buffer elettroforesi ùn hè micca frescu.Dopu l'usu ripetutu di u buffer d'elettroforesi, a forza ionica diminuisce, è u so valore di pH aumenta, cusì a capacità di u buffer si debilita, chì affetta l'effettu di l'elettroforesi.Hè cunsigliatu di rimpiazzà u buffer di l'elettroforesi spessu.

● E cundizioni di elettroforesi improper sò stati utilizati.Ùn permettenu micca a tensione di più di 20 V/cm, è mantene una temperatura <30 ° C durante l'elettroforesi.Per l'elettroforesi di u filu di DNA giant, a temperatura deve esse <15 ° C. Verificate chì u buffer di l'elettroforesi hà una capacità di buffer abbastanza.

● Troppu DNA hè stata caricata nantu à u gel.Diminuisce a quantità di DNA.

● Troppu sali in l'ADN.Aduprà a precipitazione etanolu per caccià i sali eccessivu in avanzatu.

● L'ADN hè stata cuntaminata da a proteina.Utilizà l'estrazzioni di fenoli per sguassà a proteina in avanzata.

● L'ADN hè statu denaturatu.Ùn calde micca prima di l'elettroforesi.Diluite l'ADN in un tampone cù 20 mM NaCl.

2. Anomalies migrazione banda DNA

● Rinaturazione di u situ COS di u fragmentu λHind III.Scaldate l'ADN per 5 minuti sottu à 65 ° C prima di l'elettroforesi, è poi rinfriscà nantu à l'unità di ghiaccio per 5 minuti.

● E cundizioni di elettroforesi improper sò stati utilizati.Ùn permettenu micca a tensione di più di 20 V/cm, è mantene una temperatura <30 ° C durante l'elettroforesi.Verificate chì u buffer di l'elettroforesi hà abbastanza capacità di buffer.

● L'ADN hè statu denaturatu.Ùn calde micca prima di l'elettroforesi.Diluite l'ADN in un tampone cù 20 mM NaCl.

3. Fat or no DNA bands on agarose gel

bande deboli di DNA

● Ci era insufficiente quantità o cuncentrazione di DNA caricata nantu à u gel.Aumentà a quantità di DNA.L'elettroforesi in gel di poliacrilamide hè un pocu più sensibile di l'elettroforesi di agarose, è a carica di mostra pò esse ridutta in modu adattatu.

● L'ADN hè statu degradatu.Evite a contaminazione di nucleasi.

● L'ADN hè statu elettroforesatu da u gel.Electrophorese u gel per menu tempu, utilizate una tensione più bassa, o utilizate un gel per centu più altu.

● Improper W light source hè stata utilizata per a visualizazione di l'ADN di bromuru di ethidium.Aduprate una luce di lunghezza d'onda corta (254 nm) W per una sensibilità più grande.

4. Bande di DNA mancanti

U DNA di piccula dimensione hè stata elettroforesata da u gel.Electrophorese u gel per menu tempu, utilizate una tensione più bassa, o utilizate un gel per centu più altu.

● Difficile di distingue i bandi di DNA di molekulari simili.Aumentà u tempu di l'elettroforesi, è verificate a cuncentrazionedi u gelu per assicurà chì u gelu per centu currettamente deve esse utilizatu.

● L'ADN hè statu denaturatu.Ùn calde micca prima di l'elettroforesi.Diluite l'ADN in un tampone cù 20 mM NaCl.

● I filamenti di DNA sò enormi, è l'elettroforesi di gel cunvinziunali ùn hè micca adattatu.Analizà nantu à l'elettroforesi in gel di impulsi.Chì altri prublemi avete avutu cù l'elettroforesi in gel di agarose?Avemu da ricerca più per guide in u futuru.

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Tempu di post: May-09-2022