L'elettroforesi di gel hè unu di i metudi maiò utilizati in a biologia molekulari per l'analisi di DNA. Stu metudu implica a migrazione di frammenti di DNA à traversu un gel, induve sò siparati in basa di grandezza o forma. Tuttavia, avete mai scontru qualchì errore durante i vostri esperimenti di elettroforesi, cum'è bande smeared in u gel d'agarose, o senza bande nantu à u gel? Chì puderia esse a causa di sti errori?
I nostri tecnichi anu riassuntu coppie di risoluzione di prublemi quì per a vostra riferenza.
1. Bandi smeared in gel d'agarose
●U DNA hè statu degradatu. Evite a contaminazione di nucleasi.
● U buffer elettroforesi ùn hè micca frescu. Dopu l'usu ripetutu di u buffer d'elettroforesi, a forza ionica diminuisce, è u so valore di pH aumenta, cusì a capacità di u buffer si debilita, chì affetta l'effettu di l'elettroforesi. Hè cunsigliatu di rimpiazzà u buffer di l'elettroforesi spessu.
● E cundizioni di elettroforesi improper sò stati utilizati. Ùn permettenu micca a tensione di più di 20 V/cm, è mantene una temperatura <30 ° C durante l'elettroforesi. Per l'elettroforesi di u filu di DNA gigante, a temperatura deve esse <15 ° C. Verificate chì u buffer di l'elettroforesi hà una capacità di buffer abbastanza.
● Troppu DNA hè stata caricata nantu à u gel. Diminuisce a quantità di DNA.
● Troppu sali in l'ADN. Aduprà a precipitazione etanolu per caccià i sali eccessivu in avanzatu.
● L'ADN hè stata cuntaminata da a proteina. Utilizà l'estrazzioni di fenoli per sguassà a proteina in avanzata.
● L'ADN hè statu denaturatu. Ùn calde micca prima di l'elettroforesi. Diluite l'ADN in un tampone cù 20 mM NaCl.
2. Anomalies migrazione banda DNA
● Rinaturazione di u situ COS di u fragmentu λHind III. Scaldate l'ADN per 5 minuti sottu à 65 ° C prima di l'elettroforesi, è poi rinfriscà nantu à l'unità di ghiaccio per 5 minuti.
● E cundizioni di elettroforesi improper sò stati utilizati. Ùn permettenu micca a tensione di più di 20 V/cm, è mantene una temperatura <30 ° C durante l'elettroforesi. Verificate chì u buffer di l'elettroforesi hà abbastanza capacità di buffer.
● L'ADN hè statu denaturatu. Ùn calde micca prima di l'elettroforesi. Diluite l'ADN in un tampone cù 20 mM NaCl.
3. Fat or no DNA bands on agarose gel
● Ci era insufficiente quantità o cuncentrazione di DNA caricata nantu à u gel. Aumentà a quantità di DNA. L'elettroforesi in gel di poliacrilamide hè un pocu più sensibile di l'elettroforesi di agarose, è a carica di mostra pò esse ridutta in modu adattatu.
● L'ADN hè statu degradatu. Evite a contaminazione di nucleasi.
● L'ADN hè statu elettroforesatu da u gel. Electrophorese u gel per menu tempu, utilizate una tensione più bassa, o utilizate un gel per centu più altu.
● Improper W light source hè stata utilizata per a visualizazione di l'ADN di bromuru di ethidium. Aduprate una luce di lunghezza d'onda corta (254 nm) W per una sensibilità più grande.
4. Bande di DNA mancanti
●U DNA di piccula dimensione hè stata elettroforesata da u gel. Electrophorese u gel per menu tempu, utilizate una tensione più bassa, o utilizate un gel per centu più altu.
● Difficile di distingue i bandi di DNA di molekulari simili. Aumentà u tempu di l'elettroforesi, è verificate a cuncentrazionedi u gelu per assicurà chì u gelu per centu currettamente deve esse utilizatu.
● L'ADN hè statu denaturatu. Ùn calde micca prima di l'elettroforesi. Diluite l'ADN in un tampone cù 20 mM NaCl.
● I filamenti di DNA sò enormi, è l'elettroforesi di gel cunvinziunali ùn hè micca adattatu. Analizà nantu à l'elettroforesi in gel di impulsi.Chì altri prublemi avete avutu cù l'elettroforesi in gel di agarose? Avemu da ricerca più per guide in u futuru.
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Tempu di post: May-09-2022