Avete qualchì difficultà in a preparazione di gel d'agarose?Lasciate seguità cùu nostru tecnicu di laboratoriu in a preparazione di u gel.
U prucessu di preparazione di gel d'agarose implica i seguenti passi:
Pisà a Polvere di Agarose
Pesa a quantità necessaria di agarose in polvere secondu a cuncentrazione desiderata per u vostru esperimentu. A cuncentrazione di agarose cumuni varieghja da 0,5% à 3%. Cuncentrazioni più altu sò aduprate per separà molécule di DNA più chjuche, mentri cuncentrazioni più bassu sò per molécule più grande.
Preparazione di Soluzione tampone
Aghjunghjite u polu di agarose à un buffer d'elettroforesi adattatu, cum'è 1 × TAE o 1 × TBE. U voluminu di buffer deve currisponde à u voluminu di gel necessariu per u vostru esperimentu.
Dissolve l'Agarose
Scaldate l'agarose è a mistura di tampone finu à chì l'agarose si dissolve completamente. Questu pò esse fattu cù un microondas o una piastra calda. Agite a suluzione intermittenti per impediscenu di bolliri. A suluzione di agarose deve esse chjaru senza particelle visibili.
Cooling the Agarose Solution
Lasciate a suluzione d'agarose riscaldata per rinfriscà à circa 50-60 ° C. Agite a suluzione durante u prucessu di rinfrescante per prevene a solidificazione prematura.
Adding Acid Nucleic Stain (Opcional)
Se vulete visualizà l'ADN o l'RNA in u gelu, pudete aghjunghje una tacca di l'acidu nucleicu, cum'è GelRed o bromuru di ethidium, in questa fase. Quandu manipule sti macchie, portate guanti è fate prudenza, postu chì ponu esse tossichi.
Casting u Gel
Pour a suluzione d'agarose rinfriscata in un stampu di gel d'elettroforesi preparatu. Inserite un pettine per creà pozzi di mostra, assicurendu chì u pettine hè sicuru è a suluzione hè uniformemente distribuita in u moldu.
Gel di solidificazione
Permette chì u gel si solidificà à a temperatura di l'ambienti, chì tipicamenti dura 20-30 minuti secondu a cuncentrazione è u grossu di u gel.
Rcaccià u Pettine
Una volta chì u gel hè solidificatu cumplettamente, sguassate cù cura u pettine per revelà i pozzi di mostra. Pone u gel inseme à u muffa in a camera di l'elettroforesi è copre cù a quantità adatta di buffer di l'elettroforesi, assicurendu chì u gel hè cumplettamente immersa.
Preparazione per l'elettroforesi
Dopu chì u gel hè prontu, caricate i vostri campioni in i pozzi, è prucede cù l'esperimentu di l'elettroforesi.
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Tempu di post: 15-10-2024