U sistema di blotting semi-seccu DYCP-40C hè utilizatu inseme cù l'alimentazione di l'elettroforesi per trasferisce e proteine in i geli di poliacrilammide nantu à a membrana cum'è a membrana di nitrocellulosa, a membrana di nylon è a membrana PVDF. U blotting semi-seccu hè realizatu cù l'elettrodi di piastra di grafite in una cunfigurazione horizontale, sandwiching un gel è una membrana trà fogli di carta di filtru imbevuta di buffer chì funzionanu cum'è u reservoir di ioni. Durante u trasferimentu elettroforeticu, e molécule caricate negativamente migranu fora di u gelu è si movenu versu l'elettrodu pusitivu, induve sò dipositati nantu à a membrana. L'elettrodi di piastra, siparati solu da u gelu è a pila di carta di filtru, furnisce una forza di campu elevata (V / cm) à traversu u gel, effettuendu trasferimenti assai efficaci è rapidi. A superficia di trasferimentu di a cellula di elettroforesi DYCP - 40C più chjuca hè 150 × 150 (mm), adattata per trasferimentu di gel standard, cumpresi quelli di a cellula di elettroforesi DYCZ-24DN è DYCZ-24EN.
Amparate più nantu à u funziunamentu di stu apparatu trans blot semi-seccu.
Materiali, strumenti per u funziunamentu di DYCP-40C
Alimentazione di l'elettroforesi DYY-6C, apparatu trans blot semi-seccu DYCP-40C, soluzione tampone, è cuntenituri per suluzione tampone. ecc.
Passi di l'operazione
1. Pone u gelu cù vetru di vetru in a suluzione di buffer di trasferimentu
2. Misura a dimensione di gel
3.Preparate 3 pezzi di carta di filtru secondu a dimensione di u gel, è a dimensione di u carta di filtru deve esse un pocu più grande di a dimensione di u gel; Quì avemu aduprà carta filtru Whatman;
4.Mettite 3 pezzi di carta di filtru in a suluzione di buffer lentamente, è lasciate chì a carta di filtru si immerge in u buffer tutale, è evite micca di bolle d'aria;
5.Preparate è tagliate a membrana di nitrocellulose secondu a dimensione di u gel è u filtru di carta; a dimensione di a membrana di nitrocellulose deve esse più grande chì a dimensione di u gel è u filtru di carta;
6.Pone a membrana di nitrocellulose in a suluzione buffer;
7.Pigliate a carta di filtru di 3 pezzi è caccià a soluzione tampone extra finu à chì nisuna soluzione tampone cade da a membrana; è poi mette a carta di filtru nantu à u fondu di DYCP-40C;
8.Pigliate u gel da i vetri di vetru, pulite delicatamente u gel di stacking, è mette u gel in a suluzione tampone;
9.Pone u gelu nantu à a carta di filtru, cuminciate da una estremità di u gelu per evità e bolle d'aria;
10.Aduprate un strumentu propiu per caccià e bolle d'aria trà u gel è a carta di filtru.
11.Coperta a membrana di nitrocellulose nantu à u gelu, u latu russu versu u gel. E poi aduprate un strumentu propiu per caccià e bolle d'aria trà a membrana è u gel. Pone 3 pezzi di filtru di carta nantu à a membrana. Sempre bisognu di utilizà un strumentu propiu per caccià e bolle d'aria trà a carta di filtru è a membrana.
12.Coperta u coperchio, è stabilisce i paràmetri di esecuzione di l'elettroforesi, u currenti custanti 80mA;
13.L'elettroforesi hè fatta. Avemu u risultatu cum'è seguente;
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Postu tempu: Apr-04-2023