Preparazione di gel d'agarose per l'elettroforesi
Nota: portate sempre guanti usa e getta!
Istruzzioni Step-by-Step
Pisà a Polvere di Agarose:usi pisà carta è un bilanciu elettronicu per misurà 0.3g di agarose in polvere (basatu nantu à un sistema 30ml).
Preparazione di u buffer TBST:priparà 30ml di 1x TBST buffer in un Erlenmeyer da 100ml.
Dissoluzione di Polvere di Agarose:pu nostru agarose in polvere in u buffer TBST è scuzzulate bè.Mettili inà un microondas è calore (tipicamenti per 50 seconde, cupertu cù un fogliu d'aluminiu) finu à dissolutu cumplettamente.
Cooling and Adding Nuclease:use guanti per caccià a mistura da u micru è lasciate rinfriscà un pocu in acqua fridda finu à ch'ella hè calda (circa 60 ° C). Ajouter 2 µl de nuclease (sustitué Eb) tout en agitant pour mélanger bien.
Preparazione di u Gel Mold:
- Cmagra è secca uvassoio di gel è u dispositivu di casting di geldi u tank di l'elettroforesi.
- Place u gelvassain u tank internu è inserisce u pettine in una pusizione fissa.
- Imbulighjate a suluzione di gel d'agarose, rinfriscata à circa 65 ° C, è versà cù cura nantu à uvassa di gelin uDispositiu di casting di gel, sparghjendu lentamente finu à chì forma una capa uniforme di gel nantu à u vetru di vetru.
- Lasciate à pusà à a temperatura di l'ambienti finu à chì u gel solidifica completamente.
- Eliminate delicatamente u pettine verticalmente è sguassate a cinta.
- Pone u gelvassain u tank di l'elettroforesi.
Impurtante: Assicuratevi chì ùn ci sò micca bolle d'aria in l'area di i denti di pettine. A superficia di u liquidu deve esse liscia senza ripples.
Running the Gel
Caricà u Gel
Dopu chì u gel si solidifica, mette in u tank di l'elettroforesi è pour u buffer di l'elettroforesi finu à chì u gel hè sottumessu.
Preparazione di campioni
- Pigliate u marcatore è u buffer di carica da u frigorifero.
- Aggiuncenu 6 µl di tampone di carica à i campioni è mischjà bè.
- Aduprendu una micropipetta, carica lentamente i campioni in i grandi pozzi di u gelu (attenzione à ùn punisce u gelu è ùn dispensa tuttu u voluminu per evità bolle d'aria).
- Caricate u marcatore in qualsiasi di i picculi pozzi (ricurdate a so pusizione).
Inizio di l'elettroforesi
- Coperta u cisterna di l'elettroforesi è principià l'elettroforesi immediatamente dopu a carica di u gel.
- Pone a tensione à 60-100V. I campioni migraranu da l'elettrodu negativu (nìvuru) à l'elettrodu pusitivu (russu).
- A tensione più alta riduce a gamma di separazione efficace di u gel d'agarose.
- Ferma l'elettroforesi quandu u colorante blu di bromofenol righjunghji circa 1 cm da u bordu di u fondu di a placa di gel.
Osservà i risultati
Dopu a separazione di e bande, ferma l'elettroforesi, caccià u gelu, è detecte direttamente è fotografia.
Aduprate un sistema di imaghjini di gel per fotografà è osservà e bande (verificà s'ellu ci sò bande per u marcatore o campioni).
Dopu avè ottenutu a vostra mappa di banda di gel, truvate u marcatore. Basatu nantu à u marcatore, pudete stabilisce e bande di destinazione!
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Tempu di Postu: Aug-09-2024