Principiu
L'elettroforesi di film d'acetate di cellulosa hè un metudu d'elettroforesi chì utilizanu un film d'acetate di cellulosa cum'è supportu. U fenomenu in u quali particeddi carichi si move versu l'elettrodu oppostu sottu l'azzione di u campu elettricu hè chjamatu elettroforesi. Siccomu ogni proteina hà un puntu isoelettricu specificu, se una proteina hè posta in una suluzione cù un pH più bassu di u so puntu isoelettricu, a proteina serà caricata positivamente è si move versu l'elettrodu negativu. À u cuntrariu, si move à u polu pusitivu. Perchè a vitezza di e molécule di prutezione chì si movenu in un campu elettricu hè in relazione cù a so carica, a forma è a dimensione di e molécule, diverse proteini ponu esse siparati da l'elettroforesi. U serum cuntene una varietà di proteini, tutti chì anu punti isoelectric à pH 7,5 o menu. Quandu u serum hè pusatu in un tampone di pH 8.6 per eseguisce l'elettroforesi, tutte e proteine serum sò caricate negativamente è si movenu versu u latu pusitivu in u campu elettricu. Siccomu diverse proteine serum anu cariche diverse à u stessu pH, i particeddi molecolari sò diffirenti in grandezza, è cusì a velocità di migrazione hè diversa, è sò siparati da l'elettroforesi. I punti isoelettrici è i pesi molecolari di e proteine serum sò mostrati in a tabella sottu:
| Proteina | Punti isoelettrici (PI) | Pesu moleculare |
| Albumina | 4,88 | 69 000 |
| α1-gloulina | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulina | 5.06 | 300 000 |
| β-glouline | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-glouline | 6,85 ~ 7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
L'esperimentu hè di separà diversi proteini in u serum di sangue cù a membrana acetate di cellulosa (abbr. CAM) cum'è supportu di supportu. CAM hè un tipu di loos spumanteefilm cun bona uniforme, è u gruixu hè 0.1mm-1.5mm, chì hà una certa absorption acqua.
Materiali, strumenti è reagenti per l'elettroforesi CAM
Campioni:serum di sangue umanu sanu
Strumentu:alimentazione DYY-6C, cisterna di elettroforesi DYCP-38C, carica di mostra superiore WD-9404
I reagenti
1) membrana acetate di cellulosa 7X9cm
2) PH 8.6 barbitol buffer suluzione (forza ionica 0.05-0.09, hè 0.06tid tempu.): piglià 1,84g acidu dietil barbituric, è poi piglià 1.03g Diethyl sodium pentobarbital, aghjunghje un pocu acqua distillata à u calore à dissolve, è fà finu à 1000 ml;
3) Macchia: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, aghjunghje 100ml acqua distillata;
4) TBS/T o PBS/T: 45ml 95% etanol, 5ml acid acetic glacial, aghjunghje 50ml acqua distillata;
5) Soluzione di pulizia: 70 ml di etanolu anidru, 30 ml d'acidu aceticu glaciale.
Pruvate Method
1) Preparate a membrana: Immerse a membrana in a suluzione di buffer barbitol 30min-8h, è caccià, sguassate a suluzione extra da carta assorbente.
2) Loading samples: Distinguite u latu russu è u latu liscio di a membrana, è marcate una linea à una distanza di 1,5 cm à l'estremità superiore da u latu ruvido. Caricà i campioni cù un strumentu di carica di mostra superiore da u latu ruvido. Nota: I campioni devenu esse caricati nantu à u latu russu di a membrana. Dopu chì i campioni di serum sò penetrati cumplettamente in a membrana, vultate a membrana, mette u latu russu (cù campioni) in faccia à u cisterna, è a fine cù i mostri si mette in l'elettrodu negativu.
3) Elettroforesi: Accende l'alimentazione, 0,4～0,6 m A/cm membrana, u tempu di corsa hè 30-45 min. Dopu avè eseguitu l'elettroforesi, spegne u putere.
4) Stain and clean: Pigliate a membrana da u tank, è immerseit in a suluzione di tintura per 5 min, è poi pulita in a suluzione di pulizia per 3-4 volte, finu à chì u culore di fondu hè chjaru. I prutiìni serum deve esse mustratu nantu à i bandi, è nurmalmente ci sò cinque zoni, formanu l'estremità superiore à a linea marcata, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Conservazione: mette l'elettroforesi seccabandain una suluzione di pulizia per 10-15 minuti, è poi caccià è appiccicà nantu à un vetru pulitu, dopu chì si secca, diventerà una film trasparente.banda.
SperimentaRisultatu
L'effettu di separazione di i campioni di serum hè bonu, è ùn ci hè micca un fenomenu di coda di banda. A ripetibilità di i risultati varieghja per via di i prucessi di prova è i metudi di l'esperimentatore, è a ripetibilità hè alta.
Cunclusioni
U sistema rapidu di rilevazione di l'elettroforesi clinica (Cisterna di elettroforesiDYCP-38C,alimentazione elettricaDYY-6C è carica di mostra superiore WD-9404) prodotta da u nostruA cumpagnia Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdrisponde à i requisiti sperimentali,èi risultati sò riproducibili, simplici è veloci, adattati perinsignamenturicerca.
Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd hè specializatu in a fabricazione di prudutti d'elettroforesi per l'industria di a scienza di a vita, chìhà più di 50 anni di storia in Cina è a cumpagnia pò furnisce prudutti stabili è d'alta qualità in tuttu u mondu. À traversu anni di sviluppu, hè degnu di a vostra scelta!
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Tempu di Postu: Nov-14-2022