Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) hè una tecnica sensitiva è rapida aduprata principalmente per detectà danni di DNA è riparà in cellule individuali. U nome "Comet Assay" vene da a forma caratteristica cum'è cometa chì appare in i risultati: u nucleu di a cellula forma a "testa", mentre chì i frammenti di DNA danucati migranu, creendu una "coda" chì s'assumiglia à una cometa.
Principiu
U principiu di u Comet Assay hè basatu annantu à a migrazione di frammenti di DNA in un campu elettricu. L'ADN intactu resta in u nucleu di a cellula, mentre chì l'ADN danatu o frammentatu migra versu l'anodu, furmendu a "coda" di a cometa. A durata è l'intensità di a cuda sò direttamente proporzionali à l'estensione di u dannu di l'ADN.
Prucedura
- Preparazione cellulare: I celi per esse pruvati sò mischiati cù agarose à bassu puntu di fusione è sparghje nantu à i vetri di microscopiu per furmà una capa uniforme.
- Lisi cellulare: I diapositivi sò immersi in una suluzione di lisi per sguassà a membrana cellulare è a membrana nucleare, espunendu l'ADN.
- Elettroforesi: I slides sò posti in una camera d'elettroforesi in cundizioni alkaline o neutre. I frammenti di DNA danucati migranu versu l'elettrodu pusitivu sottu l'influenza di u campu elettricu.
- Tintura: Dopu l'elettroforesi, i diapositivi sò macchiati cù un tinte fluoriscente (per esempiu, bromuru di etidio) per visualizà l'ADN.
- Analisi microscòpica: Utilizendu un microscopiu di fluoriscenza o un software specializatu, e forme di cometa sò analizate, è parametri cum'è a lunghezza di a cuda è l'intensità sò misurati.
Image da biorender
Analisi di dati
I risultati di u Comet Assay sò valutati nantu à parechji paràmetri chjave:
- Lunghezza di a cuda: Rapprisenta a distanza chì l'ADN migra, chì indica l'estensione di u dannu di l'ADN.
- Cuntenutu di DNA di a coda: U percentualità di DNA chì migra in a cuda, spessu usata cum'è una misura quantitativa di danni à l'ADN.
- Olive Tail Moment (OTM): Unisce a lunghezza di a cuda è u cuntenutu di l'ADN di a cuda per furnisce una misura più cumpleta di i danni à l'ADN.
Applicazioni
- Studi di genotossicità: U Comet Assay hè largamente utilizatu per valutà l'effetti di i sustanzi chimichi, droghe è radiazioni nantu à l'ADN di e cellule, facendu un strumentu chjave per a prova di genotossicità.
- Tossicologia Ambientale: Aiuta à analizà l'impattu di l'inquinanti ambientali nantu à l'ADN di l'organisimi, furnisce una visione di a sicurità di l'ecosistema.
- Ricerca medica è clinica: U Comet Assay hè utilizatu per studià i miccanismi di riparazione di l'ADN, u cancer, è altre malatie ligati à l'ADN. Evalua ancu l'impattu di e terapie di u cancer cum'è a radioterapia è a chimioterapia nantu à l'ADN.
- Scienze Alimentari è Agriculture: Adupratu per valutà a sicurità di pesticidi, additivi alimentarii è altri sustanzi, è per studià i so effetti tossichi in mudelli animali.
Vantaghji
- Alta Sensibilità: Capace di detectà bassi livelli di danni à l'ADN.
- Operazione simplice: A tecnica hè simplice, facendu adattata per screening high-throughput.
- Applicazione larga: Pò esse appiicatu à diversi tipi di cellula, cumprese cellule animali è vegetali.
- Sfide di quantificazione: Mentre furnisce dati qualitativi nantu à u dannu di l'ADN, l'analisi quantitativa si basa assai in u software è tecniche di analisi di l'imaghjini.
- Cundizioni sperimentali: I risultati ponu esse influenzati da fatturi cum'è u tempu di l'elettroforesi è u pH, chì necessitanu un cuntrollu attentu di e cundizioni sperimentali.
Limitazioni
U Comet Assay hè un strumentu preziosu in a ricerca biomedica, a scienza ambientale è u sviluppu di droghe per via di a so flessibilità è a so alta sensibilità in a rilevazione di danni è riparazione di DNA. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)offre una camera di elettroforesi orizzontale per l'analisi di comete. Benvenuti à cuntattate cun noi per discutiri nantu à uAssai di cometaprotocolu.
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Tempu di Postu: Settembre 20-2024