1. Classificazione
L'elettroforesi di gel hè divisa in tipi verticali (cumpresi i gel di colonna è i gel di lastra) è tipi horizontale (principalmente i gel di lastra) (Figura 6-18). In generale, a separazione verticale hè ligeramente superiore à l'orizontale, ma a preparazione di gel horizontale hà almenu quattru vantaghji: ci hè un sustegnu sottu à u gelu sanu, chì permette l'usu di l'agarose di cuncentrazione bassa; hè pussibule di preparà platti di gel d'agarose di diverse specificazioni; a preparazione di gel è a carica di mostra sò più convenienti; a camera di l'elettroforesi hè faciule da custruisce è costu-efficace. Siccomu l'elettroforesi horizontale hè realizata cù a piastra di gel d'agarose cumplettamente immersa à circa 1 mm sottu à a superficia di u buffer di l'elettroforesi, hè ancu chjamata elettroforesi sommersa.
Serbatoio di elettroforesi DYCP-31DN per elettroforesi su gel di agarosio
2.Buffer System
In a separazione di l'acidu nucleicu, a maiò parte di i sistemi adoptanu sistemi cuntinui. I tamponi di elettroforesi cumunimenti usati includenu TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L àcid boric, 0.0024mol/L EDTA) tampone è THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L). acetate di sodiu, tampone 0,0018 mol/L EDTA). Questi tamponi sò generalmente preparati cum'è solu suluzione 10x è diluiti à a cuncentrazione necessaria quandu sò in usu. I tassi di migrazione di DNA lineari è circulari in gel di agarose varienu cù u buffer utilizatu. In u buffer, a rata di migrazione di DNA lineale hè più grande di quella di DNA circular, mentri in u buffer TBE, u cuntrariu hè veru.
3.Preparazione di Agarose Gel
(1) Preparazione di Gel Agarose Horizontale
(a) Preparate a cuncentrazione necessaria di gel d'agarose cù 1x tampone di elettroforesi.
(b) Scaldate l'agarose per a dissoluzione cumpleta sia in un bagnu di acqua bollente, in un agitatore magneticu, o in un micru. Cool the solution agarose to 55 ° C and add ethidium bromure (EB) colorante à una cuncentrazione finale di 0,5 μg/ml.
(c) Seal the edges of glass or acrylic plates with a small amount of agarose gel, aghjunghje un pettine, è pusà i denti di pettine à circa 0,5 ~ 1,0 mm sopra à a piastra.
(d) Pour a suluzione di gel d'agarose fusione continuamente in u vetru o u moldu di a piastra acrilica (u grossu dipende da u voluminu di a mostra di DNA), evitendu l'intruduzioni di bolle d'aria. Lasciate solidificà naturalmente à a temperatura di l'ambienti.
(e) Eliminate cù cura u pettine dopu a solidificazione completa. Aghjunghjite una quantità approprita di buffer d'elettroforesi à u cisterna di gel, assicurendu chì a piastra di gel hè immersa à circa 1 mm sottu à a superficia di u buffer di l'elettroforesi.
(2) Preparazione di Vertical Agarose Gel
(a) Eliminate u grassu o u residuu da i vetri di vetru lavandu cù etanolu.
(b) Posate i platti di spazii trà i diga anteriori è posteriori, allineate i bordi di i platti di spacer cù i diga anteriore è posteriore, è assicurateli cù pinze.
(c) Aghjunghjite 2% di agarose in 1x buffer trà i bordi di e piastre di spaziatore per furmà un tappu d'agarose di 1 cm in u fondu di a camera di casting di gel.
(d) Pour u gel d'agarose funnu à a cuncentrazione desiderata, preparatu in 1x buffer, in a camera di gel à 1 cm sottu à a cima.
(e) Inserite u pettine, evitendu di intrappulà bolle d'aria sottu i denti di u pettine. Calchì volta, arrughe pò apparisce à i denti pettine durante u rinfrescante di gel d'agarose; in tali casi, aghjunghje solu un pocu di agarose funnu à a cima per solidificà.
(f) Eliminate u pettine. Per prevene a fuga di buffer in u slot di carica, sigillate a cunnessione trà a piastra di gel d'agarose è a camera di elettroforesi cù 2% agarose è aghjunghje a quantità necessaria di buffer.
(g) Aghjunghjite 1x tampone di elettroforesi à a camera di gel.
(h) Caricà cù cura i campioni di DNA nantu à u gel di agarose sottu u buffer.
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Tempu di Postu: Dec-07-2023